大鼠Elisa試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬生長激素(GH)水平。用純化的豬生長激素(GH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入生長激素(GH),再與HRP標記的生長激素(GH)抗體結合,大鼠Elisa試劑盒形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的生長激素(GH)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中豬生長激素(GH)濃度。
大鼠Elisa試劑盒提供原倍標準品一支,分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,大鼠Elisa試劑盒然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。豬ELISA試劑盒小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
現在市場上的大鼠Elisa試劑盒質量參差不齊,各類生物公司扎堆,如何去挑選適合自己的試劑盒就顯得特別重要,具體我們總結有以下幾點可供參考:
一、特異性,大鼠Elisa試劑盒的特異性與試劑盒的關鍵組分,抗體對有關,若抗體對中之一為多抗,另一個必須為單抗,建議使用雙單抗。
二、靈敏度,靈敏度反映的是試劑盒檢出被檢物質的zui低量的能力,用戶可根據自己樣本中待檢指標的量選擇合適的試劑盒,如果待檢指標量很低,一般的試劑盒不能滿足要求,可選擇高敏的大鼠Elisa試劑盒。
三、重復性,科學實驗講求重復性,一般大鼠Elisa試劑盒,其板內和板間變異系數應該控制在15%以內。
四、簡便性,試劑盒在保證高質量數據的情況下,實驗時間越短,操作越便利,越容易受到用戶歡迎!這也不妨作為選擇試劑盒的一個指標。
五、經濟性,進口分裝試劑盒因為省去不少物流和報關費用,與國外*試劑相比價格上有比較大的優惠,大鼠Elisa試劑盒而且能提供比較靈活的包裝規格,特別是48T等小包裝,目前很多客戶因為對品牌的信任度問題,主要還是選擇國外*,但是國內進口分裝比較成熟的公司仍然是一個非常好的選擇!
大鼠Elisa試劑盒訂單下了,收到貨到運用這段時間,也是要好好保存的,要特別注意避免出現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,大鼠Elisa試劑盒在以HRP為標記酶的ELISA測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應顯色,樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,大鼠Elisa試劑盒一則細菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產生分解作用;二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產生非特異性干擾,血清標本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,大鼠Elisa試劑盒如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應在-70℃以下,冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用,從而引起假陰性結果。此外,凍融標本的混勻亦應注意,不要進行劇烈振蕩,反復顛倒混勻即可,大鼠Elisa試劑盒在保存中如出現細菌污染所致的混濁或絮狀物時,應離心沉淀后取上清檢測。